技術(shù)文章
Technical articles產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)是非常優(yōu)秀的酶免試驗(yàn)顯色劑,能溶解于多種有機(jī)溶劑和雙蒸水中,為穩(wěn)定的無(wú)色溶液,與適量過(guò)氧化脲或雙氧水與緩沖液混勻后與過(guò)氧化物酶作用產(chǎn)生清晰的藍(lán)色產(chǎn)物,極易觀察。由于其靈敏度高,配制后的工作液穩(wěn)定,加上無(wú)致癌特性,被廣泛用于酶聯(lián)免疫(ELISA)試驗(yàn)和尿試紙的檢測(cè)反應(yīng)等,TMB主要應(yīng)用于酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA),經(jīng)典的方法是采用A、B液分開(kāi)配制,使用前再混合的方法,并且長(zhǎng)期存放穩(wěn)定,本試劑一般情況下為無(wú)色,有時(shí)略顯淺藍(lán)色或淺黃色。
TMB底物顯色試劑盒(ELISA,HRP顯色)主要由TMB顯色液、TMBBuffer、TMB氧化劑組成,其特點(diǎn)是:1、靈敏度高;2、穩(wěn)定性好,顯色終止后讀數(shù)穩(wěn)定;3、背景低:底物溶液在450nm檢測(cè)時(shí)OD值一般小于0.05。該試劑僅用于科研領(lǐng)域,不宜用于臨床診斷或其他用途。
自備材料:
1、酶標(biāo)儀、酶標(biāo)板或 96 孔板、恒溫箱(備選)
2、(備選)終止液:鹽酸或硫酸等
操作步驟(僅供參考):
1、用適當(dāng)?shù)母蓛羧萜?/span>(用純凈水反復(fù)沖洗),取試劑(A)、(B)、(C),按 A:B:C= 5000:5000:4的比例混合,即為 TMB 顯色工作液,待達(dá)到室溫后即可使用。
2、加液:加完 HRP 結(jié)合物并溫育一定時(shí)間,洗板 3~5 次,每孔加 TMB 顯色工作液 100 μl,在室溫(15~25℃)或 37℃下溫育 10~30 分鐘。
3、(選做)終止:加等體積的1M 鹽酸或硫酸溶液終止反應(yīng),孔中反應(yīng)液由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
4、讀數(shù):30min內(nèi)在 450nm處讀數(shù)。
注意事項(xiàng):
1、本試劑盒給予的TMB氧化劑多于實(shí)際使用量,請(qǐng)按比例使用。
2、TMB 氧化劑易揮發(fā),請(qǐng)注意密閉保存,以免效率下降,一旦開(kāi)封請(qǐng)盡快使用。
3、TMB 氧化劑有腐蝕性,請(qǐng)勿直接接觸于人皮膚、毛發(fā)等。
4、如果出現(xiàn)高的反應(yīng)背景或沉淀,表明 TMB 底物反應(yīng)過(guò)于強(qiáng)烈。
5、終止反應(yīng)不是必須步驟,如不加終止液應(yīng)顯色完成后立即檢測(cè)。
6、一般市售的濃鹽酸為11.6M,濃硫酸為18.3M,但應(yīng)注意其揮發(fā)性。
7、為了避免產(chǎn)生沉淀,可在終止后馬上讀數(shù),或者進(jìn)一步稀釋一抗和/或 HRP結(jié)合物,再次進(jìn)行試驗(yàn)。
8、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
有效期:12個(gè)月內(nèi)有效;4℃運(yùn)輸,4℃保存。