技術(shù)文章
Technical articles產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
天然果膠類物質(zhì)以原果膠、果膠(Pectin)、果膠酸的形態(tài)廣泛存在于植物的果實(shí)、根、莖、葉中,是細(xì)胞壁的一種組成成分,它們伴隨纖維素而存在,構(gòu)成相鄰細(xì)胞中間層粘結(jié)物,使植物組織細(xì)胞緊緊黏結(jié)在一起。果膠酶(Pectinase)是一類分解果膠質(zhì)酶類的總稱,實(shí)質(zhì)是多聚半乳糖醛酸水解酶,包括原果膠酶,果膠酯酶,多聚半乳糖醛酸酶和果膠裂解酶四大類,廣泛存在于植物果實(shí)和微生物中,主要用于食品、釀酒、環(huán)保、醫(yī)藥、紡織及日化用品行業(yè)。
果膠酶(PG)檢測(cè)試劑盒(DNS 比色法)檢測(cè)原理是果膠酶水解果膠生成β-半乳糖醛酸,與二硝基水楊酸(DNS)反應(yīng)形成有色化合物,該化合物呈色強(qiáng)度與半乳糖醛酸濃度成正比,于分光光度計(jì) 540nm 處測(cè)定吸光度,通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較計(jì)算出樣品中果膠酶活性,主要用于定量檢測(cè)植物組織或果實(shí)中果膠酶,反應(yīng)顏色越深,吸光度越大,果膠酶的活性越強(qiáng)。該試盒僅用于科研領(lǐng)域,不適用于臨床診斷或其他用途。
自備材料:
1、蒸餾水
2、實(shí)驗(yàn)材料:桃子、李子、蘋果、杏等果實(shí)或其他植物組織
3、電子天平、水果刀或剪刀、研缽或勻漿器、離心管或試管、離心機(jī)、水浴鍋
4、比色杯、分光光度計(jì)
操作步驟(僅供參考):
1、果膠酶提?。喝」麑?shí)或其他植物組織,洗凈,擦干,稱取剪碎的新鮮樣品 3g,置于提前 4℃預(yù)冷的研缽或勻漿器,加入 3ml 4℃預(yù)冷的 Pectinase Lysis Buffer,充分研磨或勻漿后轉(zhuǎn)入離心管或試管,4℃ 10000g 離心 10min,留取上清液,即為果膠酶提取液,4℃保存待用。
2、稀釋半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)液:取適量的半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml),按下表進(jìn)行稀釋:
加入物(單位:μl) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml) | 20 | 40 | 60 | 80 | 100 |
Pectinase Lysis Buffer | 80 | 60 | 40 | 20 | 0 |
半乳糖醛酸濃度(μg/ml) | 200 | 400 | 600 | 800 | 1000 |
3、加樣:按照下表設(shè)置空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、對(duì)照管、測(cè)定管,溶液應(yīng)按照順序依次加入,并注意避免產(chǎn)生氣泡,小心混勻。如果樣品中的果膠酶活性過(guò)高,可以減少樣品用量或適 當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定,樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置 2 平行管,求平均值。
加入物(單位:ml) | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 對(duì)照管 | 測(cè)定管 |
Pectinase Lysis Buffer | 0.3 | — | — | — |
半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)(1~5 號(hào)管) | — | 0.3 | — | — |
果膠酶提取液 | — | — | 0.2(提前煮沸 5min) | 0.2 |
Pectinase Assay Buffer | — | — | 0.1 | 0.1 |
— | 37℃水浴 1h。 | |||
DNS 顯色液 | 0.3 | 0.3 | 0.3 | 0.3 |
4、測(cè)定:沸水浴 5min,自來(lái)水中將離心管或試管冷卻至室溫,以蒸餾水稀釋至 2.4ml, 混勻,比色杯光徑 1cm,以空白管調(diào)零,以分光光度計(jì)立即系列標(biāo)準(zhǔn)管、對(duì)照管、測(cè)定管在 540nm 處吸光度。
注意事項(xiàng):
1、 取樣量、試劑用量應(yīng)根據(jù)果膠含量適當(dāng)調(diào)整。
2、 可溶性糖對(duì)測(cè)定結(jié)果有較大影響,應(yīng)去除樣品中的可溶性糖。
3、 Pectinase Lysis Buffer 應(yīng)密閉保存,避免有效成分揮發(fā)。
4、 37℃水浴 1h 后,應(yīng)立即加入 DNS 顯色液。
5、 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
有效期:6 個(gè)月有效;低溫運(yùn)輸,按要求保存。