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影響ELISA實驗的部分因素

更新時間:2014-08-30點(diǎn)擊次數(shù):1364

                                  影響ELISA實驗的部分因素

 

     目前,病毒性疾病的診斷主要依賴對其抗原或是抗體的檢測,國內(nèi)使用zui多的就是酶聯(lián)免疫吸附法實驗,酶免實驗靈敏度較高。但是如何保證結(jié)果的,結(jié)合實驗人員實際操作,對影響酶免檢測結(jié)果的因素粗略的分析一下。

一 試劑盒的選擇

   時機(jī)和質(zhì)量直接影響到結(jié)果的準(zhǔn)確性。目前國內(nèi)試劑盒與國外的質(zhì)量相差不大,94年起國家對體外診斷試劑統(tǒng)一實行批批檢測。我們的經(jīng)驗是根據(jù)同行對試劑盒的使用滿意度,部分根據(jù)衛(wèi)生部檢測中心對參加室間質(zhì)評實驗室的試劑盒使用情況綜合評價。

通常試劑盒的效期是根據(jù)酶結(jié)合物的穩(wěn)定性確定。這是試劑的核心組份,要防止反復(fù)的劇烈溫差變化,取用時的原則“即取即用”減少酶的失活,或者直接采購小包裝的試劑盒。

二標(biāo)本

標(biāo)本質(zhì)量的好壞直接影響到結(jié)果的準(zhǔn)確性,目前實驗室zui常用的標(biāo)本為血清。首先家養(yǎng)一定要在血塊*收縮分離后進(jìn)行,否則纖維蛋白容易吸附孔底導(dǎo)致假陽性結(jié)果。溶血對酶免實驗結(jié)果也會有較大影響。在標(biāo)本采集時用玻璃試管采集,有報道塑料試管存放,進(jìn)行乙肝兩對半檢測。結(jié)果4H后明顯偏低,這是因為聚乙烯有吸附抗原或抗體蛋白,但是目前大多數(shù)的實驗室免疫項目并非每天都做,比如乙肝兩對半抗HCV等。

三 加樣稀釋

   我國大多數(shù)抗HCV等試驗標(biāo)本只有10μl  10%的誤差。以2μl/L HBsAg質(zhì)控血清進(jìn)行試驗,加量分別為50μl 45μl,其余條件一致,測定結(jié)果吸光度分別為0.405±0.026和0.288±0.047.因此,移液器的準(zhǔn)確性需要進(jìn)行校驗。使用進(jìn)口移液器,同時移液器,移液器要與吸頭連接緊密。

   關(guān)于稀釋劑,媒介和物的家主,國內(nèi)也有部分使用滴瓶滴加,但是加液兩不夠準(zhǔn)確會造成稀釋倍數(shù)的差距。建議使用移液器加注。

四 育溫

通常在37度的水浴箱中完成,水浴箱的溫度指示為水的溫度,不過要值得注意的是不能將反應(yīng)板放在試管架上,要是反應(yīng)板飄浮在水面上稍高出試管架,箱蓋不能時常打開,保持箱內(nèi)的溫度恒定,相反的情況容易假陽性結(jié)果。

五洗版

   選擇手動洗版,手工法洗版每洗一次在吸水紙上拍干一般都能保證洗版效果。

六顯色

   國內(nèi)酶聯(lián)免疫試劑盒的色源底一般分為AB兩種液體。由于兩種液體不穩(wěn)定,使用保存不當(dāng)容易產(chǎn)生顏色,發(fā)現(xiàn)有顏色必須丟棄,顯色時加入A液后加B液。過程按照說明書嚴(yán)格執(zhí)行。否則隨著時間的延長吸光度會下降出現(xiàn)假陽性發(fā)生。

七質(zhì)控               青島捷世康生物科技有限公司 m.amzdiy.cn    Elisa試劑盒     試劑盒廠家     Elisa試劑盒批發(fā)

 

   正確的結(jié)果源自實驗員對各個環(huán)節(jié)標(biāo)準(zhǔn)的把控,必須做好實驗室質(zhì)控,主要就是血清的制備,每次檢測時與常規(guī)標(biāo)本同時進(jìn)行。

   由于試劑盒效期短,可以采取即刻法連續(xù)檢測三次,就是對三次結(jié)果進(jìn)行質(zhì)控,發(fā)生失控時,該批次實驗就需要從做。符合要求才能夠報告。

                                                         摘自施根林

                                                   2014年8月30日