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    細胞膜的流動性或微粘度

    更新時間:2016-07-25點擊次數(shù):1923

    細胞膜的流動性或微粘度 

     

        膜的流動性或者微粘度,可以通過測量結(jié)合到膜雙分子層中的疏水熒光探針的熒光偏振來研究。因為熒光分子吸收偏振光的幾率和發(fā)射熒光的偏振度與熒光分子相對于激發(fā)光偏振面的空間取向有關(guān)。

        若以線偏振光激發(fā)隨機取向的熒光分子,那么,與激發(fā)光偏振面取向一致的那些熒光分子具有zui大的吸收。由于多數(shù)熒光分子的激發(fā)太壽命是幾毫微秒的數(shù)量級,已經(jīng)吸收了偏振光的一部份熒光分子,到它們發(fā)射熒光時,已經(jīng)偏離開它們的原始取向,使得發(fā)射出熒光偏振面的方向?qū)l(fā)生變化。

        若用兩個互相垂直的偏振面測量發(fā)射的熒光強度之間的關(guān)系,可以估計熒光分子自由轉(zhuǎn)動的程度。以I1和I2分別代表平行于或者垂直于激發(fā)光偏振面的熒光強度。

       流式細胞術(shù)測量熒光偏振常用的熒光探針為DPH(Di-phenylhexatriene)。DPH是不帶電荷的疏水性物質(zhì),在水介質(zhì)中幾乎沒有熒光,在非極性溶劑中用紫外光激發(fā),(zui大激發(fā)波長為351nm),發(fā)藍色熒光(zui大發(fā)射波長為430nm)。

       DPH的標記程序為:將DPH制備成溶解于THF (Tetrahydrofuran,四氫呋喃)濃度為2nM的貯液,保存于4℃暗處。用PBS稀釋貯存液成為2uM的工作液,對于含約2×106細胞的1ml細胞懸液(在PBS中),加入1ml DPH工作液,在37℃下消化30分鐘,離心洗細胞后,重新懸浮在冷PBS中,置于冰上待流式測量。在熒光顯微鏡下觀察DPH結(jié)合熒光,可見到細胞內(nèi)膜和細胞外膜呈現(xiàn)明亮藍色DPH熒光,其熒光強度約為不染色區(qū)熒光強度的30倍。

        除DPH以外,還有其它一些測量膜流動性或微粘度的熒光探針,例如DiIC18(3),它的激發(fā)zui大值為546nm,發(fā)射zui大值為565nm。還有DMA-DPH(1-(4-dimethylaminop-henyl)-6-phenylhexatriene)),它的激發(fā)zui大值為400nm,發(fā)射zui大值為500nm,DMA-DPH除光譜特性比DPH向長波方向移動外,另一個優(yōu)點是向細胞內(nèi)部標記比DPH慢些。